Главная » 2014»Октябрь»1 » Исследование функциональной активности ГАМКА-рецептор/СГ-ионофорного комплекса на различных экспериментальных моделях эпилептогенеза.
04:56
Исследование функциональной активности ГАМКА-рецептор/СГ-ионофорного комплекса на различных экспериментальных моделях эпилептогенеза.
Исследование функциональной активности ГАМКА-рецептор/СГ-ионофорного комплекса на различных экспериментальных моделях эпилептогенеза
Диссертация
Автор: Андреев, Андрей Андреевич
Название: Исследование функциональной активности ГАМКА-рецептор/СГ-ионофорного комплекса на различных экспериментальных моделях эпилептогенеза
Справка: Андреев, Андрей Андреевич. Исследование функциональной активности ГАМКА-рецептор/СГ-ионофорного комплекса на различных экспериментальных моделях эпилептогенеза Москва, 2005 0 c. :
Объем: 0 стр.
Информация: Москва, 2005
Содержание:
ВВЕДЕНИЕ
Глава ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
11ГАМКергическая система
111Рецепторы ГАМК
112ГАМКА-рецепторы
113 Изменение физиологической активности ГАМК в зависимости от особенностей субъединичного состава рецепторного комплекса
114 Участки связывания в ГАМКл-рецепторе
12 модели формирования эпилептической активности
121Электростимуляционныйкиндлинг WAG/Rij)
123 Фармакологические модели эпилептизации мозга комплекс
125 Синаптонейросомы
Глава II МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
21 Исследование действия коразола in vitro
22 Методика проведения коразолового киндлинга
23 Проведение электростимуляционного киндлинга
24 Приготовление синаптонейросом
25 Методика проведения эксперимента на синаптонейросомах
26 Количественное определение белка
27 Определение статистической достоверности результатов
Глава III РЕЗУЛЬТАТЫ
31 Влияние однократного введения субсудорожной дозы коразола
122 генетическая предрасположенность к эпилепсии (крысы линии
124 Влияние коразолового киндлинга на ГАМКА-рецепторный на функциональную активность ГАМК-рецепторного комплекса
32 Изучение изменения уровня функциональной активности ГАМКрецепторного комплекса синаптических мембран коры головного мозга крыс в динамике развития коразолового киндлинга
33 Исследование СГ проводимости синаптических мембран коры и гиппокампа крыс подвергнутых электростимуляционному киндлингу гиппокампа крыс линии WAG/Rij, обладающих генетической предрасположенностью к абсансной эпилепсии
Глава IV ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
ЛИТЕРАТУРА
34 Исследование СГ проводимости синаптических мембран коры и
Введение:
Актуальность проблемы. Эпилепсия, согласно определению экспертов ВОЗ (Женева, 1980), является хроническим заболеванием головного мозга человека, характеризующееся повторными припадками, которые возникают в результате чрезмерных нейронных разрядов и сопровождаются разнообразными клюшческими и параклиническими симптомами. Борьба с эпилепсией относится к числу первоочередных задач, так как по данным М. F. Mendez (1995) этим заболеванием страдают от 20 до 40 млн человек (показатель распространенности 0,68 Несмотря на значительные успехи в области терапии различных форм эпилепсии у 25% больных лечение не приводит к успеху (Карлов В. Д., 1990; Schmidt, Morselli, 1985). Широкая распространенность, хронически-прогредиентное течение эпилепсии делает ее не только медицинской, но и важной социальной проблемой. Как известно, в основе эпилептизации нейронов лежит нарушение баланса между тормозными и возбуждающими процессами в сторону преобладания возбуждения (Карлов В.Д., 1990; Крыжановский Г.Н., 1980, 2002). Такая ситуация возникает как в результате нарушения тормозных ГДМК-ергических механизмов, так и усиленного входа Са ергическое торможение реализуется при активации и Na (Крыжановский Г.Н., 1983, 1990, 1991; Heinemann, Hamon, 1986). ГДМКГДМКл-рецептора (ГДМКА-рецептор/С1ионофорного комплекса), который представляет собой сложноорганизованный олигомерный протеиновый комплекс, состояпщй из субъединиц связывающих ГДМК, бензодиазепины, барбитураты, взаимодействие с которыми приводит к усилению активности всего комплекса и увеличению входа СГ, что приводит к гиперполяризационному торможению нейрона. В связи с этим особое внимания заслуживает вопрос о роли ф)шкционального состояния ГДЫКл-рецепторного комплекса в развитии хронической эпилептизации мозга. Моделью такой эпилептизации может служить киндлинг хроническое воздействие либо путем подпороговых электростимуляций мозговых структур, либо путем введения эпилептогенов в субконвульсивных дозах (Крыжановский Г.Н., Карпова М.Н., Панков О.Ю., 1990, 1991; Карпова М.Н. и др., 1992, 1994). Феномен киндлинга заключается в возникновении судорог и увеличении их тяжести при последующих эпилептогенных воздействиях. Снижение показано функциональной при активности формах ГАМКА-рецепторного комплекса различных эпилептической активности и чаще всего с использованием методики регистрации клеточных потенциалов (Merlin L.R., Wong R.K., 1993; Stephens D.N., 1993); существуют единичные работы, выполненные на синаптосомах (Базян А С Жулин В.В., Карпова М.Н., 1998, 2001). Преимуществом данной работы является применение в качестве объекта исследований механизмов синаптонейросом. Использование синаптонейросом в экспериментальных исследованиях внесло существенный вклад в понимание синаптической передачи (Swartz, 1985; Hollingsworth Е.В., 1985; Scheetz A.J., 1997) Выполненная нами работа является одной из немногих (Wong, 1984; Harris, 1985; CordaM.G., Georgi M.O., 1991, 1992), в которых функциональная активность ГАМКА-рецепторного комплекса при экспериментальной эпилептизации определялась по входу СГ в синаптонейросомы. Особенность данной работы заключается также в проведении сравнительного исследования функциональной активности ГАМКА-рецепторного комплекса синаптических мембран головного мозга на различных моделях эпилептической активности и в динамике хронической эпилептизации мозга. Теоретическое значение. Исследование патогенетических механизмов формирования генерализованных судорожных проявлений эпилептогенеза на различных экспериментальных моделях у животных. Практическое значение. Практическая значимость выявления состояния ГАМКА-рецептор/СГ-ионофорного комплекса определяется тем, что данный комплекс является эндогенным антиэпилептическим фактором у животных, в частности, обладающих генетической предрасположенностью к эпилепсии. В связи с этим, данное исследование является важным для разработки патогенетической терапии эпилепсии, на основании данных о состоянии С1проводимости мозга при различных формах эпилептогенеза..Новизна исследования. Изучение функциональной активности ГАМКдрецептор/СГ-ионофорного комплекса (играющего одну из ключевых ролей в патогенезе эпилепсии) на различных моделях эпилептогенеза с использованием радио-изотопного метода является одной из первых попыток в области молекулярных исследований эпилепсии. В опытах с однократным введением крысам подпороговых доз коразола выявлено существенное снижение активности ГАМКА-рецептор/С1-ионофорного через 15 мин и устранение этого эффекта через 48 ч после инъекщш конвульсанта. Этот факт свидетельствует о том, что периодические инъекции коразола не приводят к его накоплению в мозге экспериментальных животных. ГАМКА- В опытах по изучению динамики фармакологического киндлинга показан двух-фазный характер изменения функциональной активности рецепторного комплекса активацию на начальных этапах (5 дней) и ингибирование на конечном этапе (30 дней). При этом уже на начальном этапе фармакологического киндлинга отмечено усиление чувствительности ГАМКА-рецептор/С1-ионофорного комплекса к классическим конвульсантам пикротоксину, бикукуллину и коразолу. Исследование модели электростимуляционного киндлинга выявило активацию ГАМКА-рецептор/С1-ионофорного комплекса коры мозга экспериментальных животных и подавление активности этого комплекса в месте электростимуляции (гиппокампе). У крыс линии WAG/Rij, модели генетически контролируемой абсансной эпилепсии, выявлен более высокий уровень активности ГАМКА-рецепторного комплекса коры головного мозга. Полученные данные свидетельствуют о том, что в основе эпилептогенеза лежат различные механизмы. Снижение функциональной активности ГАМКА-рецептор/С1ионофорного комплекса может служить причиной эпилептогенеза только на поздних стадиях фармакологического киндлинга. Целью нашей работы является изучение на различных моделях эпилептогенеза, а так же на различных этапах коразолового киндлинга функциональной активности ГАМКА-рецептор/СГ-ионофорного комплекса синаптических мембран мозга крыс, который отражает уровень ГАМКергического торможения в структурах мозга. Задачи нашей научной работы. 1. Иззить влияние однократного введения субсудорожной дозы пентилентетразола на функциональную активность ГАМКА-рецептор/СГионофорного комплекса. 2. Определить изменения мусцимол-стимулируемой СГ-проводимости в динамике развития пентилентетразолового киндлинга (после 5, 14 и 30 дней хронического введения пентилентетразола). 3. Изучить функциональную активность ГАМКл-рецептор/СГионофорного комплекса синаптических мембран в: коре и гиппокампе головного мозга крыс на модели электростимуляционного киндлинга 4. Исследовать функционатаную активность ГАМКл-рецептор/СГионофорного комплекса синаптических мембран в коре мозга крыс линии WAG/Rij с генетически детерминированными абсансами. Основные положения, выносимые на защиту. 1.Изменение функциональной активности ГАМК ГАМКА-рецептор/С1ионофорного комплекса синаптических мембран коры мозга крыс при проведении пентилентетразолового киндлинга имеет 2-х фазный характер: на начальных этапах киндлинга происходит повышение, а на более поздних этапах снижение его функциональной активности. 2.Хроническая стимуляция гиппокампа при электростимуляционном киндлинге приводит к повышению функциональной активности ГАМКлрецептор/СГ-ионофорного комплекса синаптических мембран коры, но к снижению данного показателя в гиппокампе головного мозга крыс. 3. Крысы линии WAG/Rij, с генетической предрасположенностью к эпилепсии, обладают повышенной мозга функциональной активностью ГАМКА- рецептор/СГ-ионофорного комплекса синаптических мембран коры головного
