Главная » 2014»Август»23 » Скачать Методы оценки и механизмы развития строительных предприятий. Коновалова, Ирина Анатольевна бесплатно
06:49
Скачать Методы оценки и механизмы развития строительных предприятий. Коновалова, Ирина Анатольевна бесплатно
Методы оценки и механизмы развития строительных предприятий
Диссертация
Автор: Коновалова, Ирина Анатольевна
Название: Методы оценки и механизмы развития строительных предприятий
Справка: Коновалова, Ирина Анатольевна. Методы оценки и механизмы развития строительных предприятий : диссертация кандидата экономических наук : 08.00.05 Пенза, 2006 170 c. : 61 06-8/4087
Объем: 170 стр.
Информация: Пенза, 2006
Содержание:
ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1 АНАЛИТИЧЕСКИЙ ОБЗОР
11 Современные представления об особенностях и механизмах фагоцитоза псевдотуберкулезного микроба
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
ГЛАВА 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
21 Штаммы псевдотуберкулезного микроба
22 Питательные среды
23 Реактивы
24 Экспериментальные животные
25 Способ контроля плазмидного состава
26 Получение макрофагов и полиморфноядерных лейкоцитов
27 Электронная микроскопия
28 Определение функциональной активности фагоцитов
281 Определение хемотаксической способности
282 Определение адгезивной способности
283 Изучение фагоцитарной активности
284 Определение частоты слияния фагосом с лизосомами
285 Определение метаболитов кислорода
286 Определение активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы
287 Определение активности НАДФ-Н-оксидазы
288 Определение активности супероксиддисмутазы
289 Определение активности миелопероксидазы
2810 Определение активности кислой фосфатазы
2811 Определение содержания неферментных катионных белков
29 Другие методы
ГЛАВА 3 ФАГОЦИТАРНАЯ АКТИВНОСТЬ МАКРОФАГОВ И ПО-ЛИМОРФНОЯДЕРНЫХ ЛЕЙКОЦИТОВ В ОТНОШЕНИИ ПСЕВДОТУБЕРКУЛЕЗНОГО МИКРОБА С РАЗНЫМ НАБОРОМ ПЛАЗ
31 Хемотаксические и адгезивные свойства фагоцитов при взаимодействии с псевдотуберкулезным микробом
32 Показатели фагоцитарной активности и завершенности фагоцитоза
33 Показатели активации фагоцитов по реакции восстановления тетразолия нитросинего
34 Активность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы
35 Активность НАДФ-Н-оксидазы
36 Активность супероксиддисмутазы
37 Активность миелопероксидазы
38 Активность кислой фосфатазы
39 Содержание неферментных катионных белков
Введение:
Актуальность проблемы
Проблема патогенности псевдотуберкулезного микроба представляет собой интересный, но недостаточно изученный раздел его биологии. До сих пор остаются не выясненными механизмы взаимодействия возбудителя псевдотуберкулеза и организма хозяина, особенно на ранних этапах инфекции, когда микроорганизму необходимо преодолеть защитные - гуморальные и клеточные - барьеры макроорганизма и при этом не только выжить, но и увеличить размеры своей популяции. На этой стадии развития инфекционного процесса возбудитель в качестве инструмента воздействия на системы организма хозяина использует макромолекулы, обладающие способностью ингибировать на той или иной стадии фагоцитарный процесс [20, 49].
По мнению ряда авторов, ведущими факторами патогенности возбудителя псевдотуберкулеза являются адгезины и инвазины, а также продукты, обусловливающие внеклеточное выживание бактерий путем подавления фагоцитоза или цитопатического воздействия на фагоциты. Что касается внутриклеточного этапа развития возбудителя, то имеющиеся данные фрагментарны, нередко противоречивы [27, 84].
Накопленные к настоящему времени материалы однозначно свидетельствуют о том, что патогенность бактерий, в частности Y. pseudotuberculosis, является биологически сложным, полидетерминантным признаком, находящимся под контролем регуляторных систем, детерминирующих выражение как хромосомных, так и плазмидных генов, которые ответственны за синтез макромолекул, принимающих участие в развитии генерализованного инфекционного процесса [53, 80, 91]. Резистентость псевдотуберкулезного микроба к фагоцитозу, проявляющуюся в способности к факультативному паразитированию в фагоцитах и вследствие этого играющую важную роль в патогенезе инфекции, многие авторы связывают с наличием у него плазмид и их спектром [66,67, 140].
К настоящему времени выполнено значительное количество исследований, посвященных плазмиде вирулентности иерсиний, однако многие аспекты функционирования антифагоцитарного фенотипа ее генов остаются неясными. Гораздо менее изучен другой внехромосомный репликон Y. pseudotuberculosis -плазмида pVM82 м.м. 82 мДа. Заболеваемость в виде эпидемических вспышек могут обусловливать оба доминирующих плазмидовара - 48 мДа и 48:82 мДа, содержащиеся в геноме основного этиологического агента псевдотуберкулезной инфекции у людей в Сибири и на Дальнем Востоке - Y. pseudotuberculosis 1 се-ровара. При этом для одноплазмидного варианта характерны вспышки с более благоприятным течением, преобладанием легких и стертых форм заболевания. Плазмида pVM82 не оказывает влияния на течение эпидемических вспышек, но обусловливает более тяжелое течение заболевания с частым вовлечением в патологический процесс печени и селезенки, поражением суставов и длительностью клинического течения[1,6,67].
С другой стороны, весьма обоснованно полагать, что характер инфекционного процесса, а также течение иммунных реакций при псевдотуберкулезе зависят не только от вирулентности возбудителя, но и от эффективности бактерицидных систем макроорганизма, в том числе антимикробной активности макрофагов и полиморфноядерных лейкоцитов [56]. С
К настоящему времени накоплены довольно значительные экспериментальные материалы, затрагивающие более или менее основательно отдельные этапы фагоцитарного процесса при контакте клеток хозяина с псевдотуберкулезным микробом [23, 60, 106]. Между тем, главное звено фагоцитоза - бактерицидные реакции фагоцитов при их взаимодействии с Y. pseudotuberculosis, особенно закономерности этих реакций при фагоцитозе бактерий с разным плаз-мидным составом, - изучены в меньшей мере, что затрудняет понимание механизмов как патогенности псевдотуберкулезного микроба, так и ответных реакций макроорганизма.
Основная цель работы - изучение бактерицидных механизмов (кислород-зависимые и кислороднезависимые антимикробные системы) фагоцитоза псевдотуберкулезного микроба с разным набором плазмид макрофагами и поли-морфноядерными лейкоцитами экспериментальных животных.
Задачи исследования:
1. Изучить фагоцитарную активность макрофагов (перитонеальных, альвеолярных) и полиморфноядерных лейкоцитов экспериментальных животных в отношении псевдотуберкулезного микроба бесплазмидного и плазмидсодержа-щих вариантов;
2. Исследовать активность ферментных и других систем макрофагов и ПЯЛ, определяющих бактерицидный потенциал фагоцитов при поглощении псевдотуберкулезного микроба бесплазмидного и плазмидсодержащих вариантов.
3. Сопоставить бактерицидную активность в отношении псевдотуберкулезного микроба перитонеальных, альвеолярных макрофагов и ПЯЛ.
4. Исследовать влияние плазмиды вирулентности Y. pseudotuberculosis на * бактерицидные реакции фагоцитов.
Научная новизна
На основе комплексного сравнительного исследования впервые получены материалы, характеризующие неизвестные ранее особенности воздействия макрофагов и ПЯЛ экспериментальных животных на псевдотуберкулезный микроб бесплазмидного и плазмидсодержащих вариантов на всех основных стадиях фагоцитарного процесса.
Установлено, что показатели хемотаксиса и адгезии при взаимодействии макрофагов (как перитонеальных, так и альвеолярных) и ПЯЛ с псевдотуберкулезным микробом в случае бесплазмидного варианта выше, чем в отношении бактерий, содержащих плазмиду pYV48 или комбинацию плазмид pYV48 и pVM82 (рYV48 :pVM82).
Показано, что плазмидсодержащие бактерии более устойчивы к разрушению макрофагами и ПЯЛ, чем клетки контрольного бесплазмидного штамма. Плазмида pYV48 в сочетании с pVM82 повышает устойчивость иерсиний к фагоцитозу, подавляет реактивность фагоцитов, что приводит к снижению показателей завершенности фагоцитоза псевдотуберкулезного микроба.
Выявлено, что активность ферментов "окислительного взрыва" (глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы и НАДФ-Н-оксидазы), а также супероксиддисмутазы и миелопероксидазы в макрофагах при фагоцитозе бесплазмидных клеток выше, чем в случае плазмидсодержащих псевдотуберкулезных микробов. Бактерии, несущие плазмиду pYV48 или комбинацию плазмид (pYV48:pVM82), подавляют окислительный взрыв в макрофагах и ПЯЛ, снижают активность супероксид-дисмутазы, миелопероксидазы и кислой фосфатазы, уменьшают содержание неферментных катионных белков и тем самым угнетают бактерицидную способность фагоцитов.
Теоретическое и практическое значение работы
Охарактеризованы бактерицидные механизмы взаимодействия фагоцитов и псевдотуберкулезного микроба. Адаптированы и внедрены в практику научных исследований экспериментальные приемы с использованием монослоя культуры макрофагов для количественной оценки активности ферментов, определяющих бактерицидный потенциал макрофагов при фагоцитозе псевдотуберкулезного микроба.
Результаты исследования, представленные в диссертации, использованы при составлении двух методических рекомендаций: "Способ определения активности супероксиддисмутазы в полиморфноядерных лейкоцитах и макрофагах при фагоцитозе Y. pseudotuberculosis " и "Способ определения активности глю-козо-6-фосфатдегидрогеназы и НАДФ Н-оксидазы в макрофагах.
По результатам работы оформлено два рационализаторских предложения № 301 и № 302 от 25.01.99. Разработанные методы внедрены в практику научной работы Иркутского противочумного института, Новороссийской и Тувинской противочумных станций.
Положения, выносимые на защиту
1. Плазмидсодержащий псевдотуберкулезный микроб более устойчив, чем бесплазмидный, к фагоцитозу и последующей деструкции в макрофагах и ПЯЛ.
2. Хемотаксическая и адгезивная активность макрофагов и ПЯЛ в отношении псевдотуберкулезного микроба зависит не только от наличия в нем плазмид, но и их качественного состава.
3. Факторами, повышающим устойчивость плазмидсодержащего псевдотуберкулезного микроба к фагоцитозу, является его большая способность ингиби-ровать системы макроорганизма, обеспечивающие выработку активных форм кислорода, синтез неферментных катионных белков, активность СОД и миело-пероксидазы, что приводит к снижению бактерицидной способности фагоцитов.
Апробация работы. Материалы, изложенные в диссертации, представлены на:
Международных научных конференциях "Проблемы иерсиниозов и других актуальных инфекций" (С.-Петербург, 2000), "Природноочаговые инфекции" (Улан-Батор, 2000), "Проблемы биологической и экологической безопасности" (Оболенск, 2000); Всероссийских научных конференциях "Экологозависимая патология" (Чита, 1999) и "Проблемы медицины и биологии" (Кемерово, 1999); Всероссийском научно-практическом молодежном симпозиуме "Экология Байкала и Прибайкалья" (Иркутск, 1999, 2000); научно-практической конференции "Актуальные вопросы инфекционной патологии" (Барнаул, 1999); научных конференциях Иркутского противочумного института (1999-2001).
Публикации. По теме диссертации опубликованы 7 научных работ.
Объем и структура работы. Диссертация состоит из введения, аналитического обзора литературы, описания материалов и методов исследования, изложения полученных результатов и их обсуждения, заключения, выводов и списка использованных литературных источников. Работа изложена на 110 страницах
