Главная » 2014»Август»8 » Скачать Совершенствование инструментов стратегического планирования на основе моделирования бизнес-процессов. Захаркина, Наталья бесплатно
07:37
Скачать Совершенствование инструментов стратегического планирования на основе моделирования бизнес-процессов. Захаркина, Наталья бесплатно
Совершенствование инструментов стратегического планирования на основе моделирования бизнес-процессов
Диссертация
Автор: Захаркина, Наталья Владимировна
Название: Совершенствование инструментов стратегического планирования на основе моделирования бизнес-процессов
Справка: Захаркина, Наталья Владимировна. Совершенствование инструментов стратегического планирования на основе моделирования бизнес-процессов : диссертация кандидата экономических наук : 08.00.05 Брянск, 2006 179 c. : 61 07-8/895
Объем: 179 стр.
Информация: Брянск, 2006
Содержание:
2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
21 Аффинная хроматография как важнейший метод аналитической и препаративной биосепарации
22 Современные стационарные фазы для динамических процессов, основанных на аффинных взаимодействиях
221 Традиционные пористые носители (высокопроницаемые частицы)
222 Непористые сорбенты
223 Перфузионные или гигапористые носители
224 Непрерывные разделительные слои (сорбенты монолитного типа)
225 Тонкие мембраноподобные слои
23 Макропористые полимерные сорбенты
231 Особенности синтеза
232 Морфология норовой структуры
233 Функционализация поверхности посредством иммобилизации аффинных лигандов
24 Особенности аффинного комплексообразования в растворе и с участием неподвижной фазы (сорбента)
241 Определение количественных характеристик специфического комплексообразования с использованием подхода аффинной хроматографии
242 Аффинные лиганды: лиганды высокой специфичности и общеспецифические аффинные лиганды
25 Проточные биореакторы на основе комплементарного связывания
26 Синтез пептидов, катализируемый иммобилизованными ферментами
27 Использование макропористых метакрилатных дисков монолитного типа в качестве носителей для твердофазного синтеза пептидов ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
31 Анализ норовой структуры монолитных сорбентов динамическим методом
32 Ковалентная иммобилизация биологически активных лигандов на ГМА-ЭДМА дисках
321 Влияние внешних параметров процесса, осуществляемого в статических условиях, на эффективную адсорбционную емкость сорбента
322 Сравнение процессов иммобилизации белков и пептидов, осуществляемых в статических и динамических условиях
323 Влияние промежуточного спейсера на количественные характеристики аффинных взаимодействий
33 Влияние внешних условий на параметры аффинных взаимодействий, реализованных на монолитных носителях
331 Зависимость эффективности аффинного связывания от скорости подвижной фазы (зональное элюирование)
332 Использование фронтального анализа для сравнения аффинного комплексообразования при различных скоростях подвижной фазы
333 Влияние поверхностной концентрации иммобилизованного лиганда на аффинные параметры исследуемых пар
334 Влияние температуры на термодинамическую прочность аффинных комплексов
34 Практические приложения исследованных процессов, основанных на межфазовом распределении вещества
341 Аффинное фракционирование пулов поликлональных антител
342 Создание проточного ферментативного биореактора на основе химотрипсина, иммобилизованного на ГМА-ЭДМА монолитных дисках
343 Прямой синтез адсорбционных лигандов на макропористых монолитных носителях (ГМА-ЭДМА дисках) с использованием подхода твердофазного пептидного синтеза (ТФПС) ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ Материалы и приборы 2 Методы
421 Ковалентное связывание лигандов с монолитными стационарными фазами
422 Высокоэффективная монолитная дисковая аффинная хроматография (ВЭМДАХ)
423 Количественное определение параметров аффинного взаимодействия методом фронтального элюирования
424 Мультифункциональная иммуноаффинная хроматография
425 Приготовление сывороток антител
426 Твердофазный пептидный синтез (ТФПС)
427 Синтез конъюгата БК-С-БСА
428 Иммуноферментный анализ
429 Ферментативный гидролиз N-бeнзoил-L-тиpoзин этилового эфира (БТЭЭ) и бычьего сывороточного альбумина (БСА)
4210Анализ продуктов ферментативного гидролиза БСА с использованием метода капиллярного электрофореза
4211 Ферментативный синтез дипептида ВосЬеиРЬеОМе с использованием химотрипсина, иммобилизованного на ГМА-ЭДМА диске
4212Химический синтез аминокислотных производных ВосЬенОМе, РЬеОМе и дипептида ВосЬеиРЬеОМе
4213Твердофазный пептидный синтез на ГМА-ЭДМА дисках
4214Гель-электрофоретический анализ ВЭМДАХ элюатов, содержащих тканевый активатор плазминогена (ТАП)
ВЫВОДЫ
Введение:
Выделение и очистка белков, пептидов и полинуклеотидов, а также исследование их взаимодействий в растворе и в локализованном состоянии играет ключевую роль как в решении фундаментальных задач теоретической биологии, так и реализации практических планов, направленных, прежде всего, на создание лекарственных препаратов на их основе. В этой области современные генно-инженерные методы получения подобных лекарственных препаратов на настоящий момент являются наиболее перспективными как из-за отсутствия ограничений по источнику сырья, так и относительно низкой стоимости конечного продукта. Генно-инженерные технологии находят широкое применение в промышленном производстве ряда биологически активных белков и пептидов, как, например, инсулина, интерферонов, окситоцина, тканевого активатора плазминогена и др. Очевидно, что в дальнейшем спектр генно-инженерных лекарственых препаратов будет только расширяться. При этом важнейшей задачей является разработка методологических подходов для аналитического и препаративного обеспечения биотехнологических процессов, позволяющих достоверно оценить структуру, степень конверсии и чистоту целевых пептидов или белков на каждой производственной стадии, а также достичь высокой эффективности их выделения из сложных сред. Грамотно построенные методы позволяют сократить время и экономические затраты на разработку всего процесса в целом. Для решения указанных задач необходимо создание и оптимизация методологического комплекса, включающего как высокоэффективную сепарацию, так и достоверную идентификацию продукта. Таким образом, все цели и задачи представленной работы, направленные именно на создание и детальное исследование новых сепарационных и биоконверсионных процессов для нужд современной биотехнологии, являются актуальными.В качестве одного из наиболее популярных методов разделения веществ, основанного на их распределении между двумя фазами, можно назвать жидкостную хроматографию (ЖХ).Межфазовое распределение вещества в жидкостной хроматографии является основным условием функционирования слоя как разделительной матрицы. Именно поэтому хроматографический процесс может служить логичным инструментом анализа пористых стационарных фаз, предназначенных для более тонких методов моделирования и практической реализации биокомплементарных взаимодействий. Очевидно, что для корректного построения и описания подобных взаимодействий необходимо свести к минимуму (или приблизить к естественному) влияние искусственной поддерживающей среды, используемой для локализации (иммобилизации) одного из активных компонентов. Идеальная стационарная фаза не должна провоцировать неспецифических взаимодействий между биологическим веществом и собственной поверхностью, обеспечивая при этом равную доступность активных поверхностных лигандов и осуществляя функцию незатрудненного транспорта как аффинанта, так и продукта.Новыми и весьма перспективными сорбентами, удовлетворяющими всем требованиям, выдвигаемым к современным стационарным фазам, являются так называемые монолитные носители, занимающие в последние годы бесспорную лидерскую позицию в данной научной и практической области. Среди них, в первую очередь, могут быть названы макропористые сополимеры 2,3эпоксипропилметакрилата (глицидилметакрилата, ГМА) и этиленгликольдиметакрилата (ЭДМА), выполненные в форме цельных тонких дисков. Успешно развиваемый несколькими мировыми исследовательскими группами новейший метод динамического разделения веществ с использованием данных оригинальных сорбентов получил название высокоэффективной мембранной (или, в настоящее время - монолитной дисковой) хроматографии (ВЭМХ или ВЭМДХ).Осуществление эффективных разделительных процессов на ультракоротких непрерывных (монолитных) слоях сорбента оказалось революционным решением, внесшим серьезные коррективы в традиционные представления об основополагающих принципах хроматографии. Во-первых, привычные, так называемые проницаемые, материалы, используемые в данном сепарационном методе в качестве стационарных фаз и представляющие собой мелкодисперсные макропористые или сетчатые сорбенты, были заменены на полностью протекаемые (конвекционные) носители. Во-вторых, было доказано, что эффективный процесс разделения может осуществляться без участия стандартной длинной колонки, функцию которой успешно выполняют тонкие мембраноподобные слои. Малая толщина (длина) разделительного слоя ГМАЭДМА сорбентов, а также открытая структура проточных каналов, на поверхности которых происходит адсорбционное разделение, обеспечивают минимальное диффузионное сопротивление нормальному массопереносу вещества, а также, что весьма существенно, низкие рабочие давления. Таким образом, реализуется возможность использования существенно более высоких скоростей элюции, чем в случае традиционных материалов-носителей.Процессы синтеза и химической модификации поверхности ГМА-ЭДМА сорбентов, а также ионообменный и гидрофобный варианты ВЭМДХ различных классов веществ представляют собой достаточно изученную научнопрактическую область. Однако, закономерности подхода биоаффинного разделения с использованием ультракоротких монолитных стационарных фаз до сих пор не исследовались. Таким образом, научная новизна представляемой работы не подлежит сомнению.Генеральной целью настоящего исследования являлось моделирование и изучение динамических процессов, основанных на распределении веществ между двумя фазами, происходящих с участием адсорбционных биологическикомплементарных взаимодействий. При этом в качестве стационарной фазы использовались макропористые ГМА-ЭДМА монолитные слои.Для достижения стратегической цели решались следующие тактические задачи: 1. Разработка и оптимизация методов функционализации монолитных сорбентов, заключающейся в ковалентной иммобилизации различных белков и пептидов (биоспецифических лигандов) на поверхности ГМАЭДМА носителей; определение влияния способа ковалентного связывания лиганда на параметры последующего аффинного комплексообразования.2. Исследование влияния внешних параметров (скорости потока подвижной фазы, температуры, поверхностной концентрации лиганда) на процесс образования биокомплементарных пар.3. Разработка метода скоростного фракционирования сложных смесей, основанного на комбинации сорбентов различной адсорбционной функциональности.4. Разработка метода твердофазного синтеза модельных пептидных последовательностей с использованием ГМА-ЭДМА монолитов; количественное сравнение аффинных пар, образованных с участием лигандов, синтезированных и иммобилизованных на норовой поверхности сорбента.5. Исследование возможности создания скоростных проточных биореакторов на основе иммобилизованного на ГМА-ЭДМА монолитах фермента (химотрипсина), катализирующего реакции как расщепления (прямой катализ), так и образования (обратный катализ) пептидной связи.Научная значимость работы заключается в формулировании новых принципов динамического образования высокоспецифических пар, которые открывают новые горизонты в исследовании биокомплементарных взаимодействий, имеющих место в живой природе. С практической точки зрения, результаты работы также представляют безусловную ценность. В качестве лишь одного примера можно назвать использование мультифункционального подхода фракционирования сложных смесей при анализе и выделении белков плазмы крови.
