Главная » 2014»Сентябрь»27 » Скачать Влияние различных факторов на адгезивные свойства Candida albicans на поверх-ности вагинальных эпителиоцитов женщин репродуктивного бесплатно
08:51
Скачать Влияние различных факторов на адгезивные свойства Candida albicans на поверх-ности вагинальных эпителиоцитов женщин репродуктивного бесплатно
Влияние различных факторов на адгезивные свойства Candida albicans на поверх-ности вагинальных эпителиоцитов женщин репродуктивного возраста
Диссертация
Автор: Свиридов, Максим Александрович
Название: Влияние различных факторов на адгезивные свойства Candida albicans на поверх-ности вагинальных эпителиоцитов женщин репродуктивного возраста
Справка: Свиридов, Максим Александрович. Влияние различных факторов на адгезивные свойства Candida albicans на поверх-ности вагинальных эпителиоцитов женщин репродуктивного возраста : диссертация кандидата медицинских наук : 03.00.07 / Свиридов Максим Александрович; [Место защиты: ГОУВПО "Челябинская государственная медицинская академия"] Челябинск, 2008 142 c. :
Объем: 142 стр.
Информация: Челябинск, 2008
Содержание:
Список основных сокращений
Введение
Глава 1 Обзор литературы
11 Экология и морфо-функциональные особенности дрожжевых грибов рода Candida
12 Морфо-функциональные особенности вагинальных эпителиоцитов женщины и колонизационная резистентность влагалища
13 Особенности взаимодействия грибов рода Candida с эпителиоцитами слизистой влагалища
Глава 2 Материалы и методы исследования
21 Общая характеристика обследованных
22 Получение исследуемого материала
221 Получение вагинальных эпителиоцитов
222 Получение буккальных эпителиоцитов
223 Получение суточной культуры С albicans
224 Получение вагинальной жидкости
225 Получение секреторных продуктов нейтрофилов периферической венозной крови
226 Получение сыворотки крови
23 Определение персистентных характеристик С albicans
231 Метод определения антилизоцимной активности С albicans
232 Метод определения антилактоферриновой активности
С albicans
233 Метод определения антикомплементарной активности
С albicans
24 Оценка адгезии С albicans на эпителиоцитах
241 Определение параметров адгезии С albicans на поверхности вагинальных и буккальных эпителиоцитов
242 Оценка прочности адгезии
25 Оценка влияния различных факторов на адгезию С albicans на вагинальном эпителии
251 Определение влияния вагинальной жидкости на адгезию
С albicans на вагинальном эпителии
252 Определение влияния муцина на адгезию С albicans на вагинальном эпителии
253 Определение влияния супернатантов неактивированных и активированных нейтрофилов на адгезию С albicans на вагинальном эпителии
254 Изучение влияния сыворотки крови на адгезию С albicans на вагинальном эпителии
255 Влияние метаболической активности вагинальных эпителиоцитов и С albicans на адгезивную активность в системе «С albicans — вагинальные эпителиоциты»
256 Влияние активности элементов цитоскелета на адгезию С albicans
26 Определение жизнеспособности вагинальных эпителиоцитов и С albicans
27 Методы статистической обработки материала
Глава 3 Изучение параметров адгезии С albicans на клетках вагинального эпителия женщин репродуктивного возраста
31 Выбор штамма С albicans для изучения адгезии
32 Оценка прочности адгезивных контактов между С albicans и вагинальными эпителиоцитами
33 Сравнительная характеристика адгезии С albicans на поверхности вагинальных и буккальных эпителиоцитов
Глава 4 Влияние метаболической активности и состояния цито скелета вагинальных эпителиоцитов и С albicans на процесс адгезии
41 Энергозависимость адгезивной способности С albicans к поверхности вагинальных эпителиоцитов
42 Зависимость адгезии С albicans на поверхности вагинальных эпителиоцитов от синтеза белка в клетках
43 Зависимость адгезии С albicans к вагинальным эпителиоцитам от состояния цитоскелета
Глава 5 Влияние гуморальных факторов сыворотки крови и вагинальной жидкости на адгезивную способность С albicans к вагинальным эпителиоцитам
51 Влияние антител сыворотки крови на адгезивную способность
С albicans к вагинальным эпителиоцитам
52 Влияние антител вагинальной жидкости на адгезивную способность С albicans к вагинальным эпителиоцитам
53 Роль муцина в адгезии С albicans на вагинальных эпителиоцитах
Глава 6 Влияние секреторных продуктов нейтрофилов на взаимодействие
С albicans с вагинальными эпителиоцитами
Глава 7 Оценка адгезивных свойств и персистентных характеристик С albicans, выделенных от больных вульвовагинальным кандидозом и практически здоровых женщин, на поверхности вагинального эпителия
71 Сравнение адгезивных свойств С albicans, выделенных от больных вульвовагинальным кандидозом и практически здоровых женщин
72 Оценка персистентных характеристик С albicans
Введение:
Актуальность исследования Большинство инфекций человека начинается с колонизации кожи и слизистых оболочек полостей, сообщающихся с внешней средой. Доля инфекционных заболеваний, заражение которыми происходит через слизистые оболочки, превалирует в сравнении с болезнями, при которых заражение возникает контактным путем через кожу (Ernst P.B.et al., 1999).
По данным ВОЗ, пятая часть населения Земли страдает различными грибковыми заболеваниями (Кисина В.И. и др., 2001). Кандидоз — самый распространенный из системных микозов человека, так как свыше 40% взрослых людей являются носителями Candida albicans (С. albicans), и любое серьезное нарушение местного или общего иммунитета может спровоцировать их активацию (Арзуманян В.Г., Семенов Б.Ф., 2001; Баруссе М.М. и др., 2004; Маянский А.Н., 2006).
В классификации микозов грибковые инфекции, возбудителями которых являются грибы рода Candida, стоят обособленно, так как способны вызывать широкий диапазон поражений: от довольно «безобидных» заболеваний кожи и слизистых оболочек до инвазивных процессов, которые могут поражать практически любой орган, нередко создавая при этом угрозу для жизни больных (Масюкова С.А. и др., 2004; Маянский А.Н., 2006).
Отмечаемый во всем мире рост заболеваемости кандидозами связан, прежде всего, с тем, что эта инфекция является оппортунистической, поэтому она носит преимущественно эндогенный характер (Самсыгина Г.А. и др., 1996; Прилепская В.Н. и др., 1997; Cannon R.D. et al., 1995). При кандидозе поражается организм человека, ослабленный воздействием различных неблагоприятных факторов: изменяющейся экологией окружающей среды, широким использованием химических средств в быту и на производстве, применением медикаментозных препаратов, особенно антибиотиков, кортикостероидов, цитостатиков, иммунодепрессантов и других (Тихомиров А.Л., Олейник Ч.Г., 2001; Кантон О.М. и др., 2007).
Среди оппортунистических инфекций кандидозные вульвовагиниты являются наиболее часто встречающимися заболеваниями во всем мире, занимая из всех инфекций влагалища второе место после бактериального вагиноза (Hiller S.L., Lau R.J., 1997), являясь одной из основных причин обращения женщин репродуктивного возраста за медицинской помощью (Прилепская В.Н., Байрамова Г.Р., 2004). Распространенность этой патологии неуклонно растет как в России, так и во всем мире (Родионов А.Н., 1998; Сергеев Ю.В. и др., 2003).
Особенностью данной инфекции является длительное течение, частое рецидивирование, возможность распространения на другие органы и системы с развитием генерализованных форм, высокая резистентность возбудителей к антимикотическим препаратам, трудность лечения беременных и новорожденных (Масюкова С.А. и др., 2004). Вот почему урогенитальный кандидоз является актуальной общеклинической проблемой и имеет социальное значение, так как снижает качество жизни женщины, вызывает аллергизацию, может привести к осложнениям беременности и патологии у новорожденных, способствует возникновению иммунодефицитных состояний, развитию неопластических процессов (Анкирская А.С. и др., 1998; Самсыгина Г.А., Буслаева Г.Н., 2004).
Слизистая влагалища является экологической нишей, в которой постоянно вегетирует большое количество различных видов бактерий, вирусов, грибов как у практически здоровых людей, так и у больных. В структуре инфекционной патологии нижнего отдела гениталий кандиды составляют 40-50% (Прилепская В.Н. и др., 1997; Прилепская В.Н., Байрамова Г.Р., 1998; Мавров И.И., 2002). С. albicans считается основным возбудителем урогенитального кандидоза. На ее долю по разным данным приходится от 60 до 90% поражений (Прилепская В.Н. и др., 1997; Мавров И.И., 2002; Тютюнник В.Л., 2003; Кунгуров Н.В. и др., 2005; Пестрикова
Т.Ю. и др., 2005; Подзолкова Н.М. и др., 2005; Байрамова Г.Р. и др., 2007; Герасимова Н.М. и др., 2007; Sobel J.D. 1998).
В последние годы большой интерес исследователей вызывает изучение взаимоотношений между кандидами и эпителиоцитами, поскольку полагают, что кандидоз является результатом нарушения баланса между механизмами клиренса в системе мукозального эпителия и условиями, обеспечивающими активное размножение и персистенцию грибов на слизистых оболочках (Сергеев А.Ю., Сергеев Ю.В., 2001).
Микроорганизмы, попавшие на слизистую оболочку, должны на ней закрепиться (адгезироваться), преодолев ряд защитных приспособлений хозяина. Адгезия С. albicans на вагинальных эпителиоцитах является начальным и критическим по своему значению этапом колонизации слизистых оболочек, определяющим возможность дальнейшего развития микотического процесса. Этот вид грибов обладает максимально выраженными адгезивными свойствами (Прилепская В.Н., Байрамова Г.Р., 2004). На реализацию адгезивного потенциала в системе «кандиды — эпителиоциты» могут оказывать влияние многие факторы как со стороны кандид, так и со стороны организма хозяина, которые изучены недостаточно и требуют уточнения.
Выход кандид за пределы очага первичной колонизации сопровождается выраженным воспалительным процессом. Одним из главных эффекторов воспалительной реакции, обеспечивающих защиту против кандидозной инвазии, служат нейтрофилы. В последние годы показано, что нейтрофилы, мигрируя на поверхность слизистых оболочек, погибают (Долгушин И.И., Бухарин О.В., 2001), возможно выделяя наружу антимикробные продукты своих лизосом, которые, обладая бактерицидностью, влияют на микрофлору, заселяющую слизистые оболочки (Андреева Ю.С., 2005). Установлено, что в вагинальном содержимом здоровых женщин содержится значительное количество нейтрофилов (Телешева Л.Ф., 2000), возможно участвующих в регуляции микробиоцепоза влагалища. Участие нейтрофильных продуктов во взаимоотношениях кандид с вагинальными эпителиоцитами остается неизвестным.
Несмотря на многочисленные исследования роли местного иммунитета в антикандидозной защите, недостаточно изучены механизмы действия клеточных и гуморальных компонентов мукозального иммунитета на адгезию кандид. Кроме того, в литературе существуют противоречивые данные о роли нормальной микрофлоры в реализации адгезивного потенциала в системе «С. albicans — вагинальные эпителиоциты».
В связи с вышеизложенным было решено изучить влияние различных факторов на адгезивные свойства С. albicans на поверхности вагинальных эпителиоцитов женщин репродуктивного возраста, уточнить роль секреторных продуктов нейтрофилов в регуляции микробиоценоза влагалища здоровых женщин, исследовать персистентный потенциал различных штаммов С. albicans и влияние его на адгезию.
Мы полагаем, что исследования по данной проблеме позволят уточнить особенности развития микотического процесса на начальном этапе колонизации слизистой оболочки влагалища С. albicans и в дальнейшем разработать мероприятия, направленные на профилактику и лечение данной патологии.
Цель исследования
Целью настоящего исследования явилось изучение особенностей адгезии Candida albicans на поверхности вагинальных эпителиоцитов женщин репродуктивного возраста и факторов, влияющих на адгезивные характеристики С. albicans.
Задачи исследования
1. Изучить адгезивные характеристики С. albicans на поверхности вагинальных эпителиоцитов в сравнении с буккальными и прочность адгезии С. albicans на поверхности клеток вагинального эпителия практически здоровых женщин репродуктивного возраста.
2. Изучить роль гликолиза, синтеза белка и изменений цитоскелета вагинальных эпителиоцитов и С. albicans в процессе адгезии.
3. Определить значение гуморальных факторов сыворотки крови и вагинальной жидкости практически здоровых женщин в адгезии С. albicans на поверхности вагинальных эпителиоцитов.
4. Изучить влияние секреторных продуктов нейтрофилов на показатели адгезии С. albicans на поверхности вагинальных эпителиоцитов.
5. Оценить взаимосвязь между наличием факторов персистенции у штаммов С. albicans и их адгезивными свойствами.
Научная новизна
Установлено, что вагинальные эпителиоциты играют активную роль во взаимоотношениях с кандидами. Адгезия С. albicans зависит от процессов гликолиза в эпителиальных и грибковых клетках. Впервые изучено влияние секреторных продуктов нейтрофилов на процесс адгезии С. albicans на поверхности вагинального эпителия и установлено, что при предварительной обработке кандид супернатантами нейтрофилов, активированных лактобактериями, адгезия снижается. Впервые проведена сравнительная оценка адгезивных показателей штаммов С. albicans, имеющих различные персистентные характеристики, выделенных из влагалища женщин, больных вульвовагинальным кандидозом, и носителей. Впервые обнаружено, что влагалищная жидкость и её компоненты, в частности муцин, препятствуют адгезии грибов на поверхности вагинальных эпителиоцитов.
Теоретическая и практическая значимость исследования
Теоретическая значимость результатов исследования состоит в расширении знаний о характере адгезии С. albicans на поверхности вагинального эпителия практически здоровых женщин репродуктивного возраста, что позволяет уточнить некоторые вопросы патогенеза микотического процесса на начальном этапе колонизации грибами слизистой оболочки влагалища. Информация о влиянии факторов содержимого влагалища на адгезивные реакции С. albicans с вагинальными эпителиоцитами позволяет дополнить сведения о механизмах их взаимоотношений.
Полученные данные позволяют расширить представление о роли нейтрофилов в защите слизистых оболочек. Определены факторы, способные влиять на адгезию С. albicans на поверхности вагинальных эпителиоцитов.
С помощью освоенного метода тестирования адгезии грибов можно выявлять женщин, слизистые оболочки которых обладают высокой способностью к адгезии клеток грибов, то есть группы риска поражения кандидоинфекцией. Кроме того, определение адгезивной способности, как одного из факторов, характеризующих патогенность грибов рода Candida, позволяет выявлять наиболее вирулентные штаммы этих микроорганизмов.
Полученные результаты могут помочь при разработке новых методов лечения и профилактики кандидоза путем целенаправленного изыскания средств блокирования адгезии грибов к поверхности слизистых оболочек.
Положения, выносимые на защиту
1. На адгезию в системе «С. albicans - эпителиоцит» влияет вид эпителия (буккальный, вагинальный), соотношение клеток грибов и эпителия. Адгезивные характеристики С. albicans in vitro выше к буккальному эпителию, чем к вагинальному, что подтверждает зависимость адгезии от органной принадлежности эпителиоцитов. При увеличении соотношения кандиды/эпителиоциты происходит возрастание показателей адгезии. Штаммы С. albicans, выделенные от больных кандидозным вульвовагинитом женщин, обладают повышенной адгезивной способностью. Высокий процент прочности адгезивных контактов между С. albicans и вагинальными эпителиоцитами (75,77%) обеспечивает устойчивую колонизацию влагалища грибами.
2. Компоненты сыворотки крови и вагинальной жидкости, секреторные продукты нейтрофилов практически здоровых женщин, муцин и блокада гликолиза кандид препятствуют адгезии С. albicans на поверхности вагинального эпителия.
3. У штаммов С. albicans, проявляющих антикомплементарную или антилактоферриновую активность, адгезивные характеристики выше по сравнению со штаммами С. albicans, не обладающими данными видами активности. Более высокие значения антилактоферриновой активности регистрируются у штаммов С. albicans, выделенных из влагалища больных вульвовагинальным кандидозом женщин, по сравнению со штаммами, полученными от носителей.
Апробация работы
Основные положения диссертации доложены, обсуждены и опубликованы на IV и V итоговой научно-практической конференции молодых ученых ЧелГМА (Челябинск, 2006, 2007), V Всероссийском конгрессе по медицинской микологии (Москва, 2007), Всероссийском научном Форуме имени академика В.И. Иоффе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге: Молекулярные основы иммунорегуляции, иммунодиагностики и иммунотерапии» (Санкт-Петербург, 2007), научно-практической конференции по медицинской микологии «X Кашкинские чтения» (Санкт-Петербург, 2007), на научной сессии, посвященной 10-летию ЮжноУральского научного центра РАМН «Медицинская академическая наука — здоровью населения Урала» (Челябинск, 2008). Работа была поддержана грантом Правительства Челябинской области в 2006 г. Результаты исследования используются в процессе преподавания на кафедре микробиологии, вирусологии, иммунологии, а также в практической работе лаборатории противоинфекционного иммунитета НИИ иммунологии ГОУ ВПО Челябинской государственной медицинской академии.
Апробация диссертации была проведена на совместном заседании НИИ иммунологии ЧелГМА, кафедры микробиологии, вирусологии, иммунологии ЧелГМА, самостоятельного курса клинической лабораторной диагностики ЧелГМА, ЦНИЛ ЧелГМА (2008).
Публикации По теме диссертации опубликовано 14 печатных работ.
Структура и объём диссертации
